專家交流:淋病的實驗室檢測方法
編輯:駐馬店泌尿醫(yī)院男專家 日期:2012-05-04 08:57 來源:駐馬店民生泌尿?qū)?漆t(yī)院
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淋病的實驗室檢測方法
(一)涂片檢查:
取患者尿道分泌物或?qū)m頸分泌物,作革蘭氏染色,在多形核白細胞內(nèi)找到革蘭氏陰性雙球菌。涂片對有大量膿性分泌物的單純淋菌性前尿道炎患者,此法陽性率在90%左右,可以初步診斷。女性宮頸分泌物中雜菌多,敏感性和特異性較差,陽性率僅為50-60%,且有假陽性,因此世界衛(wèi)生組織推薦用培養(yǎng)法檢查女病人。慢性淋病由于分泌物中淋球菌較少,陽性率低,因此要取前列腺按摩液,以提高檢出率。
咽部涂片發(fā)現(xiàn)革蘭氏陰性雙球菌不能診斷淋病,因為其他奈瑟菌屬在咽部是正常的菌群。另外對癥狀不典型的涂片陽性應作進一步檢查。
(二)培養(yǎng)檢查:
淋球菌培養(yǎng)是診斷的重要佐證,培養(yǎng)法對癥狀很輕或無癥狀的男性、女性病人都是較敏感的方法,只要培養(yǎng)陽性就可確診,在基因診斷問世以前,培養(yǎng)是世界衛(wèi)生組織推薦的篩選淋病的唯一方法。目前國外推薦選擇培養(yǎng)基有改良的Thayer-Martin(TM)培養(yǎng)基和New York City(NYC)培養(yǎng)基。國內(nèi)采用巧克力瓊脂或血瓊脂培養(yǎng)基,均含有抗生素,可選擇地抑制許多其他細菌生長。在36℃,70%濕度,含5%-10%CO2(燭缸)環(huán)境中培養(yǎng),24-48小時觀察結(jié)果。培養(yǎng)后還需進行菌落形態(tài),革蘭氏染色,氧化酶試驗和糖發(fā)酵試驗等鑒定。培養(yǎng)陽性率男性80%-95%,女性80-90%。
(三)抗原檢測
1.固相酶免疫試驗(EIA):可用來檢測臨床標本中的淋球菌抗原,在流行率很高的地區(qū)而又不能作培養(yǎng)或標本需長時間遠送時使用,可以在婦女人群中用來診斷淋球菌感染。
2.直接免疫熒光試驗:通過檢測淋球菌外膜蛋白I的單克隆抗體作直接免疫熒光試驗。但目前在男女二性標本的敏感不高,特異性差,加之實驗人員的判斷水平,故該實驗尚不能推薦用來診斷淋球菌感染。
(四)基因診斷
1.淋球菌的基因探針診斷 淋球菌的基因探針診斷,所用的探針有:質(zhì)粒DNA探針,染色體基因探針和rRNA基因探針。
2.淋球菌的基因擴增檢測 上面講述的探針技術(shù)檢測淋球菌的方法,雖然比培養(yǎng)方法在靈敏度,特異性和方便性上有了很大的提高,但其仍有一定的局限性,如多數(shù)情況下需要標本的淋球菌濃度很高,PCR技術(shù)和連接酶鏈反應的出現(xiàn)進一步提高了檢測淋球菌的靈敏性,它具有快速、靈敏、特異、簡便的優(yōu)點,可以直接檢測臨床標本中極微量的病原體。
3.臨床基因診斷淋球菌的注意事項 目前臨床檢測淋球菌的基因診斷方法主要采用PCR方法。PCR方法與LCP方法比傳統(tǒng)的培養(yǎng)法在靈敏性和特異性上有了很大的提高,時間也大大縮短。隨著基因診斷技術(shù)的不斷改進。PCR方法與LCP方法在淋球菌的檢測將會成為常規(guī)的檢測方法。
(五)藥敏試驗:在培養(yǎng)陽性后進一步作藥敏試驗。用紙片擴散法做敏感試驗,或用瓊脂平皿稀釋法測定最小抑菌濃度(MIC),用以指導選用抗生素。
(六)PPNG檢測:β-內(nèi)酰胺酶,用紙片酸度定量法
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(一)涂片檢查:
取患者尿道分泌物或?qū)m頸分泌物,作革蘭氏染色,在多形核白細胞內(nèi)找到革蘭氏陰性雙球菌。涂片對有大量膿性分泌物的單純淋菌性前尿道炎患者,此法陽性率在90%左右,可以初步診斷。女性宮頸分泌物中雜菌多,敏感性和特異性較差,陽性率僅為50-60%,且有假陽性,因此世界衛(wèi)生組織推薦用培養(yǎng)法檢查女病人。慢性淋病由于分泌物中淋球菌較少,陽性率低,因此要取前列腺按摩液,以提高檢出率。
咽部涂片發(fā)現(xiàn)革蘭氏陰性雙球菌不能診斷淋病,因為其他奈瑟菌屬在咽部是正常的菌群。另外對癥狀不典型的涂片陽性應作進一步檢查。
(二)培養(yǎng)檢查:
淋球菌培養(yǎng)是診斷的重要佐證,培養(yǎng)法對癥狀很輕或無癥狀的男性、女性病人都是較敏感的方法,只要培養(yǎng)陽性就可確診,在基因診斷問世以前,培養(yǎng)是世界衛(wèi)生組織推薦的篩選淋病的唯一方法。目前國外推薦選擇培養(yǎng)基有改良的Thayer-Martin(TM)培養(yǎng)基和New York City(NYC)培養(yǎng)基。國內(nèi)采用巧克力瓊脂或血瓊脂培養(yǎng)基,均含有抗生素,可選擇地抑制許多其他細菌生長。在36℃,70%濕度,含5%-10%CO2(燭缸)環(huán)境中培養(yǎng),24-48小時觀察結(jié)果。培養(yǎng)后還需進行菌落形態(tài),革蘭氏染色,氧化酶試驗和糖發(fā)酵試驗等鑒定。培養(yǎng)陽性率男性80%-95%,女性80-90%。
(三)抗原檢測
1.固相酶免疫試驗(EIA):可用來檢測臨床標本中的淋球菌抗原,在流行率很高的地區(qū)而又不能作培養(yǎng)或標本需長時間遠送時使用,可以在婦女人群中用來診斷淋球菌感染。
2.直接免疫熒光試驗:通過檢測淋球菌外膜蛋白I的單克隆抗體作直接免疫熒光試驗。但目前在男女二性標本的敏感不高,特異性差,加之實驗人員的判斷水平,故該實驗尚不能推薦用來診斷淋球菌感染。
(四)基因診斷
1.淋球菌的基因探針診斷 淋球菌的基因探針診斷,所用的探針有:質(zhì)粒DNA探針,染色體基因探針和rRNA基因探針。
2.淋球菌的基因擴增檢測 上面講述的探針技術(shù)檢測淋球菌的方法,雖然比培養(yǎng)方法在靈敏度,特異性和方便性上有了很大的提高,但其仍有一定的局限性,如多數(shù)情況下需要標本的淋球菌濃度很高,PCR技術(shù)和連接酶鏈反應的出現(xiàn)進一步提高了檢測淋球菌的靈敏性,它具有快速、靈敏、特異、簡便的優(yōu)點,可以直接檢測臨床標本中極微量的病原體。
3.臨床基因診斷淋球菌的注意事項 目前臨床檢測淋球菌的基因診斷方法主要采用PCR方法。PCR方法與LCP方法比傳統(tǒng)的培養(yǎng)法在靈敏性和特異性上有了很大的提高,時間也大大縮短。隨著基因診斷技術(shù)的不斷改進。PCR方法與LCP方法在淋球菌的檢測將會成為常規(guī)的檢測方法。
(五)藥敏試驗:在培養(yǎng)陽性后進一步作藥敏試驗。用紙片擴散法做敏感試驗,或用瓊脂平皿稀釋法測定最小抑菌濃度(MIC),用以指導選用抗生素。
(六)PPNG檢測:β-內(nèi)酰胺酶,用紙片酸度定量法
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